产品目录

NHS活化的琼脂糖树脂(NHS-Activated Beadose 4 FF)将蛋白质简单有效地共价固定到珠粒-糖链载体上，为抗体、抗原或其他生物分子的亲和纯化提供了有价值的方法。活化的（Beadose）琼脂糖含有能够与蛋白质或其他分子上的伯胺反应形成稳定的酰胺键的N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）官能团。耦合反应在pH7～9的无胺缓冲液中进行。不管配体的分子量或等电点（PI）耦合反应的效率均大于80%。一旦配体被固定，所制备的树脂即可以被应用到多重亲和纯化程序中。交联的串珠塞糖具有快速的线性流动电位，使其可用于重力流和中低压应用中。

• Buffer的准备
  所有的水和缓冲液均用0.22μm或0.45μm的滤膜进行过滤。
  所需附加材料：
  
  • 空柱以及兼容的离心机/收集管。
    
  • 洗涤液：1mM盐酸。
    
  • 偶联液：0.2M NaHCO3，0.5M NaCl，pH8.0或其他无胺缓冲液。
    注：偶联液可以选择碳酸盐、磷酸盐等不含氨基的缓冲液体系。缓冲液体系中加入一定浓度的盐离子减少非特异性吸附
    
  • 洗涤液1：0.1M乙酸-乙酸钠，0.5M NaCl，pH3.0。
    
  • 洗涤液2：0.1M Tris-HCl，0.5M NaCl，pH8.0。
    
  • 保护液：包含20%乙醇的1X PBS。
    
  • 含氨基的蛋白或者多肽：在2～3mL偶联液中溶解1～20mg蛋白或1～2mg多肽。对于已经在溶液中的蛋白质，在耦联液中稀释4倍，或将脱盐/透析稀释到偶联液中。彻底清除含有伯胺的缓冲液（如Tris或甘氨酸）。
    
  • 封闭液：0.5M乙醇胺，0.5M NaCl，pH8.3或0.1M Tris-HCl，pH8.5。
• 抗原偶联过程
  颠倒混匀琼脂糖凝胶几次。
  
  • 垂直放置含有NHS活化树脂的柱子，平衡柱至室温，使树脂沉降。用洗涤液通过抽滤洗涤三次，再用耦合缓冲液洗涤一次。
    注：在实验过程中不能使树脂床变干，通过吹打或震荡使结块溶解，可以通过遇冷溶液快速清洗预防水解作用。
    
  • 添加溶解好的蛋白样品到清洗完毕的NHS活化的琼脂糖中（NHS活化琼脂糖4 FF体积：样品溶液体积=1：1~2）。
    
  • 混合震荡反应在28℃进行2~4h，或者4℃过夜。
    注：NHS-Activated Beadose 4 FF必须是悬浮状态，否则会影响偶联效率。
    
  • 收集耦合样品，以便检测耦合效率。填料用去离子水进行洗涤。加入两倍柱体积的封闭液于28℃震荡反应1h。
    
  • 流干封闭液并去除，加入三倍柱体积的去离子水洗涤树脂。树脂洗涤分别通过洗涤液1、去离子水、洗涤液2、去离子水按顺序重复洗涤两次，然后加入相同体积的保护缓冲液，于2～8℃储存。